新生命干細胞公司NK細胞體外擴增技術獲重大突破
2017-10-18
近期，四川新生命干細胞科技股份有限公司研發(fā)團隊(以下簡稱“公司研發(fā)團隊”)發(fā)明的“一種可用于同種異體回輸的高純度NK體外擴增方法”已向國家知識產權局申請發(fā)明專利并獲得受理(以下簡稱“本發(fā)明專利方法”)，有望在抗擊惡性腫瘤的治療中發(fā)揮重要作用。
NK細胞(自然殺傷細胞)作為機體防御體系的第一道防線，不僅可以在天然免疫系統(tǒng)發(fā)揮其主要殺瘤效應，而且在免疫反應的早期還可以分泌不同的細胞因子和各種趨化因子來調節(jié)機體的獲得性免疫應答，是機體發(fā)揮免疫效應不可或缺的效應細胞。
近年來，NK細胞因其細胞殺傷活性高，起效快，且不受人主要組織相容性復合體(MHC)限制等優(yōu)點，相對其它用于免疫治療的細胞受到了更廣泛的關注和臨床應用。但是NK細胞在外周血中僅占淋巴細胞的10%-15%，在臍帶血中的含量更低，只有5%左右，其數量和純度尚不能滿足臨床治療的需要。
經過反復實驗，公司研發(fā)團隊通過對傳統(tǒng)方法的改進和優(yōu)化，發(fā)明了一種操作步驟相對簡便，安全高效的可用于同種異體回輸的高純度NK體外擴增方法，該方法的優(yōu)勢主要體現在：
圖1不同分離方法分離純化NK細胞的效果， A分離純化前NK細胞所占淋巴細胞的比率，B用Ficoll淋巴細胞分離液
分離方法分離純化后NK細胞所占淋巴細胞的比率，C本發(fā)明專利方法分離純化后NK細胞所占淋巴細胞的比率
1、純度高
本發(fā)明專利方法與傳統(tǒng)的Ficoll淋巴細胞分離液分離方法相比，分離獲得的NK細胞純度可達98%以上，操作步驟簡單，減少了中間環(huán)節(jié)污染的可能性，分離純化的操作時間也由4小時降低至1小時左右(見圖1);培養(yǎng)14天后，本發(fā)明專利方法本發(fā)明專利方法培養(yǎng)的NK細胞陽性率高達99.8%，顯著高于傳統(tǒng)方法的55.4%(見圖2)。
本發(fā)明專利方法所制備的NK細胞，排除了T細胞，Treg細胞，B細胞的污染，對腫瘤細胞的殺傷活性高，可滿足美國NHLBI(National heart, lung and blood Insititute)用于同種異體回輸的標準(CD3-CD56+NK細胞達到90%以上，CD19+B細胞和CD3+T細胞低于5%)，不但可用于自體NK回輸，也可以用于同種異體NK的回輸。
圖2 培養(yǎng)14天CD3-CD56+NK細胞的陽性率，A傳統(tǒng)方法、B本發(fā)明專利方法
2、安全可靠
本發(fā)明專利方法創(chuàng)造性的使用Herceptin(赫塞汀)作為包被物來激活NK細胞，因此在培養(yǎng)過程中不再依賴于傳統(tǒng)方法所必需的飼養(yǎng)細胞,杜絕了異源生物污染，提高了使用安全性，同時避免了回輸后由于體內和體外環(huán)境的差異對NK細胞在體內的擴增和殺傷活性的影響。同時，其分離純化及體外擴增時間短;而且操作簡單，減少了中間環(huán)節(jié)污染的可能性。
3、擴增倍數高
本發(fā)明專利方法可以從外周血或臍帶血中高效擴增NK細胞，可使其擴增200-1000倍，獲得滿足臨床使用的NK細胞(見圖3)。
圖3 擴增培養(yǎng)14天NK細胞的擴增倍數
圖4 擴增培養(yǎng)14天NK細胞對惡性腫瘤細胞K562的殺傷活性，A、B傳統(tǒng)方法，C、D本發(fā)明專利方法
4.殺傷活性強
本發(fā)明專利方法所制備的NK細胞在靶效比1:1、1:2時，對惡性腫瘤細胞K562的殺傷效率均顯著優(yōu)于傳統(tǒng)方法制備的NK細胞(1:1時，C本發(fā)明專利方法66.4%>A傳統(tǒng)方法19.3%;1:2時，D 本發(fā)明專利方法84.6%>B傳統(tǒng)方法25.8%)。
綜上所述，本發(fā)明專利方法提供的NK細胞分離培養(yǎng)方法，可以從外周血或臍帶血中高效獲得滿足臨床使用的NK細胞，細胞數量多、純度高、殺傷活性好，在同種異體NK回輸方面具有突出優(yōu)勢，而且本發(fā)明專利方法操作簡單、分離培養(yǎng)時間短，具有良好的應用前景。
